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熒光定量PCR檢測

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案例展示

服務原理及背景

實時熒光定量PCR在檢測體系中加入熒光基團,通過PCR 擴增反應中每一個循環(huán)產物熒光信號的實時檢測,從而實現對起始模板的定量及定性分析。隨著PCR反應的不斷進行,帶熒光的PCR產物逐步累積,信號強度等比例增強。這樣,我們可以通過熒光信號的變化來實時監(jiān)控PCR產物量的變化,得到一條擴增曲線。
實時熒光定量PCR擴增曲線有基線期、指數期和平臺期各階段。
基線期,熒光信號基本為背景信號,無法辨別產物的熒光信號值;
指數期,熒光信號超過背景信號進入指數增長階段的閾值,此時循環(huán)數稱為 Ct ( Cycle threshold) 值,PCR模板起始濃度的對數值與Ct呈線性關系。
平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,最終的 PCR產物量不能計算出起始模板拷貝數。

檢測方法

定量方法包括絕對定量分析和相對定量分析,采用SYBR Green I法和Taqman探針法。
絕對定量分析:絕對定量法也稱作標準曲線法,是一種利用已知的標準曲線來定量未知樣本目的模板起始量的方法。以 5-6 個點梯度稀釋所得的標準品(科佰可以提供大量驗證過的標準品)為模板,經實時熒光定量 PCR 擴增,以目的模板初始拷貝數的對數為橫坐標,檢測到的 CT 值為縱坐標繪制標準曲線,得到線性回歸方程,將未知樣本的 CT值帶入該方程即可計算出目的模板的起始量。
相對定量分析:相對定量可分析某一靶基因在不同樣品之間、同一樣品的不同部位之間以及某一樣品的某一部位在不同動態(tài)時期之間的 mRNA 水平上表達量的比值,也可分析靶基因與內參基因在同一樣品中拷貝數的比值。

應用領域

實時熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性強、快速高效的特點,廣泛應用于生物醫(yī)藥、臨床診斷、農業(yè)、環(huán)境科學等多個領域,常用于檢測基因表達、基因變異、轉基因等。


服務流程

科佰生物已通過ISO9001ISO13485雙體系認證,同時將按照CNAS體系要求來執(zhí)行QPCR檢測的各流程,質量有保證。


案例展示

案例一 新冠病毒(SARS-CoV-2)檢測
應用描述:qPCR被廣泛應用于新冠病毒的核酸檢測,作為診斷的金標準。
技術細節(jié):針對病毒RNA的特定區(qū)域(如ORF1ab、N基因等)設計引物和探針,通過逆轉錄qPCR(RT-qPCR)檢測病毒RNA。
優(yōu)勢:高靈敏度、高特異性,可快速獲得檢測結果,支持大規(guī)模篩查。

案例二 
轉基因作物檢測
應用描述:qPCR用于檢測食品或農產品中是否存在轉基因成分(如轉基因大豆、玉米)
技術細節(jié):提取腫瘤組織RNA,逆轉錄為cDNA后,使用qPCR檢測特定基因的表達量。
優(yōu)勢:高精度定量,可用于個性化醫(yī)療和治療方案的優(yōu)化。

案例三 
乳腺癌基因表達分析
應用描述:通過qPCR檢測乳腺癌相關基因(如BRCA1、HER2)的表達水平,評估患者的治療反應和預后。
技術細節(jié):針對轉基因作物特定的外源基因序列(如35S啟動子、NOS終止子)設計引物和探針,進行定量檢測。
優(yōu)勢:快速、準確,滿足食品安全監(jiān)管需求。

案例四 腸道菌群定量分析
應用描述:qPCR用于定量分析腸道微生物組中特定菌群的豐度(如乳酸菌、雙歧桿菌)
技術細節(jié):設計菌群特異性的16S rRNA基因引物和探針,進行定量檢測。
優(yōu)勢:高靈敏度,可精確分析微生物群落結構變化。


案例五 白血病BCR-ABL1標準品開發(fā)
應用描述:qPCR用于定量分析比較不同占比的BCR-ABL1標準品
技術細節(jié):設計BCR-ABL1的融合基因引物和探針,進行定量檢測。
優(yōu)勢:高靈敏度,可精確分析低頻比例的變化。

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