
診斷試劑
diagnosis
背景
分子診斷技術里,引物和探針是核心。引物是人工合成的寡核苷酸序列,作為核苷酸聚合起始的關鍵引導分子,其長度一般在18到27個堿基對,這與 Tm 值及特異性有關,太長(大于 38 個堿基對)會使延伸溫度超 74℃,超出 Taq DNA 聚合酶適宜反應溫度范圍,影響酶活性與 DNA 復制。
在PCR過程中,引物至關重要,是 DNA 聚合酶啟動復制提供起點。一個引物與靶區(qū)域一端的模板鏈互補配對,另一個與另一端互補結合,為聚合酶指明起始位置。PCR 啟動、溫度升高使 DNA 模板鏈解旋成單鏈后,引物依堿基互補配對原則與特定區(qū)域結合,DNA 聚合酶識別結合位點,從引物 3’端添加核苷酸,沿 5’到 3’端延伸新鏈,循環(huán)往復實現(xiàn) DNA 片段指數(shù)級擴增,引物就像建高樓的基石,保障 PCR 高效推進。
探針是帶標記核酸序列,靠分子雜交與目標核酸序列特異性結合,精準探測目標。是分子診斷關鍵''利器'',可為DNA或RNA序列,帶有如“信號燈”般的標記物。生物樣本核酸分子多,無標記時,探針與目標核酸結合的微弱信號易被淹沒。有標記物后,探針與目標序列結合,能通過放射性同位素自顯影、熒光染料發(fā)光或化學物質顯色等發(fā)出易捕捉信號,助研究者了解目標核酸情況。
引物探針介紹
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數(shù)字PCR是一種精確計數(shù)目標序列拷貝數(shù)的方法。基于泊松分布,通過將待檢測樣本分成許多獨立的反應區(qū)塊(微滴或芯片上的微小反應室),每個區(qū)塊中只存在0個或1個目標序列。查看更多 |
qPCR是一種定量檢測目標序列拷貝數(shù)的方法。它基于標準曲線法,在PCR擴增過程中實時測量擴增產(chǎn)物的數(shù)量 查看更多 |
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